Abstract 15404: Efficient and Persistent Transgene Expression by Minicircle Plasmid versus Standard Plasmid Using Ultrasound Targeted Microbubble Destruction
Notice bibliographique
Résumé
Background: Ultrasound-targeted microbubble destruction (UTMD) is a non-invasive gene transfection technique using carrier microbubbles and targeted high power ultrasound, primarily used to deliver plasmid DNA (pDNA). Minicircle-DNA (mcDNA) is a novel gene vector, which has recently been shown to have an improved and persistent transfection, compared to conventional pDNA. Hypothesis: We hypothesized that UTMD of mcDNA in a hind-limb model would exhibit a more potent and prolonged gene expression compared to conventional pDNA. Methods: In vitro , HUVECs, fibroblasts (3T3) and neonatal cardiomyocytes were transfected with molar equivalents of GFP-minicircle and GFP-plasmid. GFP expression was measured by RT-PCR and fluorescent microscopy for 28 days. We then performed a comparison of bubble binding capacities of both vectors to cationic lipid microbubbles. In vivo , for UTMD to the left proximal hind-limb adductor muscle, 500μg and 214μg of GFP-plasmid and GFP-minicircle respectively were charge-coupled with 1x10 9 cationic microbubbles and delivered via UMGD into Sprague-Dawley rats (n=30). The animals were followed for 28 days with GFP measured by RT-PCR and immunohistochemistry. Results: In vitro results showed greater GFP expression by mcDNA across all cell lines, with 7-10 fold transfection efficacy compared to pDNA. mcDNA demonstrated greater binding capacity to cationic microbubbles compared to pDNA. For plasmid and minicircle DNA, binding saturations were reached at ~6000 copies per microbubble, and ~20000 copies per microbubble respectively, suggesting a higher minicircle bubble binding efficiency. In vivo results showed higher GFP levels as early as 6 hours post minicircle UTMD, demonstrating minicircle to be a faster acting therapeutic agent over conventional plasmid. A significantly greater (p<0.01) expression of GFP was also evident at day 28 in minicircle UTMD-treated group, proving mcDNA to be a better choice for longer-term gene expression. Conclusions: In summary, UTMD using mcDNA results in more rapid and sustained transfection compared to conventional pDNA, and may be a more effective vector for translational studies of UTMD.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».