Identification and Functional Characterization of Phosphorylation Sites on GTP cyclohydrolase I
Notice bibliographique
Résumé
GTP cyclohydrolase I (GCH‐1) is the rate‐limiting enzyme for the biosynthesis of tetrahydrobiopterin (BH4), an essential cofactor for nitric oxide synthases (NOS) and aromatic amino acid hydrolases. In this study, we aim to identify specific phosphorylation sites on GCH‐1 and characterize their function. Rat GCH‐1 with FLAG tag was subcloned into a Tet‐On plasmid which was stably expressed in Flp‐in 293 cells. Mass spectrometry studies revealed GCH‐1 was phosphorylated in vivo at serine(S) 167 and threonine (T) 231. Sequence analysis of GCH‐1 protein showed 8 potential phosphorylation sites [S51, S72, T85, T91, T103, S130, S167 and T231]. Functional studies demonstrated that GCH‐1 activity and BH4 levels were significantly decreased in cells expressing phospho‐defective alanine (A) mutants S72 A, T85A, T91A, T103A or S130A while they were increased in cells expressing the T231A mutant. Furthermore, GCH1 activity, and BH4 levels were increased in cells expressing the phospho‐mimic glutamic acid (E)/aspartic acid (D) mutants S72E, T85E, T91E, T103D or T130D, while they were decreased in cells expressing the T231D mutant. Interestingly, cells expressing the S51E, but not S51A had increased cellular BH4 production, while cells expressing S167A or S167E mutant did not affect BH4 synthesis. In summary, our study suggests that GCH‐1 is positively and negatively regulated by multiple phosphorylation sites.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».