Efficient, Low-Cost Nucleofection of Passaged Chondrocytes
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Notice bibliographique
Résumé
Nucleofection of chondrocytes has been shown to be an adequate method of transfection. Using Amaxa's nucleofection system, transfection efficiencies up to 89% were achievable for vector (pmaxGFP) and 98% for siRNA (siGLO) into passaged chondrocytes. However, such methods rely on costly commercial kits with proprietary reagents limiting its use in basic science labs and in clinical translation. Bovine-passaged chondrocytes were plated in serum reduced media conditionsand then nucleofected using various in laboratory-produced buffers. Cell attachment, confluency, viability, and transfection efficiency was assessed following nucleofection. For each parameter the buffers were scored and a final rank for each buffer was determined. Buffer denoted as 1M resulted in no significant difference for cell attachment, confluency, and viability as compared to non-nucleofected controls. Nucleofection in 1M buffer, in the absence of DNA vectors, resulted in increased col2, ki67, ccnd1 mRNA levels, and decreased col1 mRNA levels at 4 days of culture. Flow cytometry revealed that the transfection efficiency of 1M buffer was comparable to that obtained using the Amaxa commercial kit. siRNA designed against lamin A/C resulted in an average reduction of lamin A and C proteins to 19% and 8% of control levels, respectively. This study identifies a cost-effective, efficient method of nonviral nucleofection of bovine-passaged chondrocytes using known buffer formulations. Human-passaged chondrocytes could also be successfully nucleofected in 1M buffer. Thus this method should facilitate cost-efficient gene targeting of cells used for articular cartilage repair in a research setting.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle