Discovery of Light-Responsive Ligands through Screening of a Light-Responsive Genetically Encoded Library
Notice bibliographique
Résumé
Light-responsive ligands are useful tools in biochemistry and cell biology because the function of these ligands can be spatially and temporally controlled. Conventional design of such ligands relies on previously available data about the structure of both the ligand and the receptor. In this paper, we describe de novo discovery of light-responsive ligands through screening of a genetically encoded light-responsive library. We ligated a photoresponsive azobenzene core to a random CX7C peptide library displayed on the coat protein of M13 phage. A one-pot alkylation/reduction of the cysteines yielded a photoresponsive library of random heptapeptide macrocycles with over 2 × 10(8) members. We characterized the reaction on-phage and optimized the yield of the modifications in phage libraries. Screening of the library against streptavidin yielded three macrocycles that bind to streptavidin in the dark and cease binding upon irradiation with 370 nm light. All ligands restored their binding properties upon thermal relaxation and could be turned ON and OFF for several cycles. We measured dissociation constants, Kd, by electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) binding assay. For ligand ACGFERERTCG, the Kd of cis and trans isomers differed by 22-fold; an incomplete isomerization (85%), however, resulted in the apparent difference of 4.5-fold between the dark and the irradiated state. We anticipate that the selection strategy described in this report can be used to find light-responsive ligands for many targets that do not have known natural ligands.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».