O4-S1.02 Molecular cloning and expression of hydrogenosomal malate dehydrogenase of<i>Trichomonas vaginalis</i>
Notice bibliographique
Résumé
Background Trichomoniasis, a sexually transmitted disease caused byTrichomonas vaginalis, is associated with adverse pregnancy outcomes, and increased risk of HIV acquisition. Malate dehydrogenase (MDH), which catalyses the interconversion of malate to oxaloacetate, has a pivotal role in the survival and pathogenicity of this amitochondrial protozoan. The objective of this study was to clone and express Malate dehydrogenase gene ofT vaginalis, and analyse the biological function of this hydrogenosomal enzyme. Methods The MDH gene from a clinical isolate ofT vaginaliswas amplified by PCR, and cloned into pET101/D-TOPO vector with a C-terminal 6XHis tag. Positive clones were screened and identified by restriction endonuclease digestion and sequence analysis. The plasmid pET101/D-MDH was then transformed into E.coli BL21(DE3) to express after IPTG induction. The expression product further analysed by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blotting. The recombinant protein was purified with Ni-NTA agarose under native conditions. Western blot, using antibody raised against whole cellT vanginalis, was performed to determine the immunogenicity of purified recombinant protein. Results The recombinant plasmid pET101/D-MDH was constructed successfully. High homology (98%) of nucleotide sequence was revealed between the cloned MDH and the corresponding gene. The recombinant protein showed a high expression level when induced with 1 mM IPTG at 37° C for 4 h. SDS-PAGE analysis showed that the recombinant MDH protein with the correct molecular weight (about 60 kDa) was expressed in E.coli BL21 (DE3). Western blotting revealed that the purified recombinant protein was specifically recognised by sera from mice infected with whole cellT vaginalis. Conclusions A prokaryotic expression system ofT vaginalisMalate dehydrogenase gene has been established successfully. The immunogenicity of the recombinant protein has been tested. The present study shows that the recombinant MDH is specific and suitable for use as an antigen for detecting anti-Trichomonas vaginalisIgG antibodies. Our work has established a good foundation for future studies onT vaginalisvaccine construction.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,007 | 0,007 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».