Multi-color Immunofluorescence Procedure for Rapid Identification of MHC Expression in Human Skeletal Muscle
Notice bibliographique
Résumé
We have previously outlined an immunofluorescence staining protocol for evaluating the fiber type composition of rat and mouse skeletal muscles. The main advantage of this protocol compared to typical myosin ATPase and immunoperoxidase procedures is that multiple myosin heavy chain (MHC) isoforms can be identified on a single cross-section, eliminating the need for multiple incubations. Additionally, detection of MHC expression directly allows for more accurate fiber type identification as differential pH-dependant inactivation of myosin ATPase has been noted across species. However, antibody cross-reactivity with human muscle must also be considered. PURPOSE: To examine the effectiveness of a rapid immunofluorescence fiber-typing procedure on human skeletal muscle. METHODS: Cross-sections of vastus lateralis muscle from eight subjects were incubated with antibodies against MHCI (BA-F8), IIa (SC-71 or 2F7), and IIx (6H1). An additional antibody, specific for all MHC isoforms except IIx (BF-35) was also used. Fiber-type specific oxidative and glycolytic capacity was measured by metabolic enzyme activity staining for succinate dehydrogenase (SDH) and glycerophosphate dehydrogenase (GPD), respectively. RESULTS: Fibers demonstrating strong reactivity with BA-F8 were classified as type I (48.9%). A considerable number of fibers stained intensely for SC-71 and 2F7 and were classified as type IIA (42.8%). A very small subset of fibers stained intermediate for both BA-F8 and SC-71 and were classified as type I/IIA (0.1%). A population of fibers displayed reactivity against 6H1; however, this population also showed intermediate staining for both MHCIIa antibodies. These fibers were identified either as pure type IIX based on their non-reactivity with BF-35 (5.6%), or as type IIAX hybrid fibers based on intermediate staining for both 6H1 and BF-35 (2.6%). Type I fibers were observed as being most oxidative and type IIX fibers as being most glycolytic, with hybrid fibers displaying enzyme activity between their respective pure counterparts. CONCLUSIONS: These results suggest that a multi-color approach using three commercially available antibodies simultaneously is effective for identifying both pure and hybrid fibers in human muscle.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,009 | 0,003 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».