Absolute Quantification of Peptides by Isotope Dilution Liquid Chromatography–Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry and Gas Chromatography/Mass Spectrometry
Notice bibliographique
Résumé
Absolute quantitation of peptides/proteins in dilute calibration solutions used in various diagnostic settings is a major challenge. Here we report the absolute quantitation of peptides by non-species-specific isotope dilution liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry (ID LC-ICPMS) based on stoichiometric Eu tagging. The method was validated by species-specific isotope dilution gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) analysis of constituent amino acids of the target peptide. Quantitative labeling of bradykinin peptide was accomplished with a commercially available 2',2″-(10-(2-((2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy)-2-oxoethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7-triyl) triacetic acid (DOTA-NHS-ester) and subsequently tagged with Eu. A (151)Eu-enriched spike was used for the non-species-specific ID LC-ICPMS determination of bradykinin. The non-species-specific ID LC-ICPMS method was cross-validated by a species-specific ID GC/MS approach, which is based on the determination of phenylalanine in bradykinin to derive the concentration of the peptide in the sample. The hydrolysis of the peptide into amino acids was achieved by microwave digestion with 4 M methanesulfonic acid, and derivatization of phenylalanine with methyl chloroformate (MCF) was performed prior to its detection by GC/MS based on a (13)C-enriched phenylalanine spike. The accuracy of the method was confirmed at various concentration levels with a typical precision of better than 5% relative standard deviation (RSD) at 20 pmol for non-species-specific ID LC-ICPMS and 500 pmol for species-specific ID GC/MS. A detection limit (3 SD) of 7.2 fmol estimated for ID LC-ICPMS with a 10 μL injection volume from three procedure blanks was obtained for bradykinin, confirming the suitability of the method for the direct determination of peptides at trace levels. To the best of our knowledge, the proposed method is the first ICPMS peptide quantification strategy which employs an independent validation strategy using species-specific ID GC/MS for amino acid quantitation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».