Co-expression plasmid construction of vascular endothelial growth factor and Fas ligand and detection of its expression in cultivated cells
Notice bibliographique
Résumé
Objective To construct the co expression plasmid of vascular endothelial growth factor (VEGF) and Fas ligand (FasL) and detect its expression in cultivated cells.Methods The primers were designed and synthetized according to the cDNA sequences of human VEGF165 and FasL,then PCR amplication,connection,splicing and insertion were carried out and the recombinant plasmids of pCI VEGF165 and pCI FasL were obtained.The co expression plasmid encoding FasL and VEGF165 named pCI FasL IRES VEGF165 (simplified as pCI FIV) was successfully constructed.The constructed plasmids (2 μg) were transfected to NIH3T3 cell with lipofectamine and the expressions of FasL and VEGF165 were detected by flow cytometry,ELISA and western blot.Results Western blot of the cell splitting solution of pCI VEGF165 and pCI FIV detected the expression of VEGF165 with the estimated molecular weight,and ELISA detection of the supernatant of pCI VEGF165 and pCI FIV revealed a secretory expression of VEGF165.Flow cytometry found the green fluorescent staining cells of pCI FasL and pCI FIV stably transfected NIH3T3 were 98.0% and 96.5% respectively,while that of the empty vector was 3.2%.ELISA detected the soluble FasL expression in the supernatant of pCI FasL and pCI FIV transfected cells.Conclusion The FasL and VEGF co expression plasmid was successfully constructed and it could express secretory VEGF165 and membrane binding FasL and soluble FasL,which lay a foundation for future gene therapy of vascular intimal hyperplasia.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».