NO DIFFERENCE BETWEEN COLLAGENASE TYPE I AND IV IN ISOLATION OF PORCINE TESTIS CELLS
Notice bibliographique
Résumé
Testicular cell isolation is a starting step for culture, enrichment, modification or transplantation of spermatogonial stem cells. Therefore, the efficiency of enzymatic dissociation of the testis tissue is a potential limiting factor for such stem cell applications. Protocols used for testis cell isolation vary depending on the species from which the testes are collected and among laboratories, and little research has compared the virtue of different protocols. Therefore in search of an optimized protocol, we started by comparing the dissociation efficiency of collagenase type I and IV, as either type has been used in similar protocols. The testes of oneweek old piglets were surgically removed, decapsulated, trimmed, minced and exposed to collagenase (either type I or IV, 0.2% in DMEM) for 30 min to be digested, followed by an additional 20 min digestion with hyaluronidase (0.2% in DMEM). The suspension was then washed (centrifuged at 350X g for 5–7 min and the supernatant was discarded) and a combination of trypsin (0.25%) with EDTA (2.21 mM) and DNase I (0.2%) in HBSS was added for 15 min for further digestion, before fetal bovine serum (FBS) was supplied to stop the digestion. The suspension was washed again and resuspended in DMEM with 12% FBS and filtered through a 40 micrometer nylon filter. Cell populations were counted and the cell viability was determined using trypan blue exclusion. Total cell number harvested per gram testicular parenchyma were 332 ± 42 X 106 (mean ± SEM, n = 13) and 335 ± 26 X 106 (mean ± SEM, n = 14), for collagenase type I and IV, respectively, displaying no significant difference. Cell viability rates were 78 ± 2% (mean ± SEM, n = 13) and 83 ± 2% (mean ± SEM, n = 14) for collagenase type I and IV, respectively, showing no significant difference (p = 0.1). These results show that in terms of the viability and cellular yield, collagenase type I and IV are equally efficient; however, our observations of the final populations of isolated cells seemed to suggest that collagenase type IV resulted in far fewer cell clusters than collagenase type I. Further research is required to evaluate the stem cell activity of the cell populations obtained from each protocol. (poster)
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».