Expression and characterization of soluble transferrin receptor in BHK cells: effect of mutations at the three asparagine glycosylation sites
Notice bibliographique
Résumé
Transferrin (TF) is a bilobal iron transport protein that specifically binds to receptors (TFR) on the cell surface and delivers iron to cells by a process involving receptor mediated endocytosis and a pH change. The TF binding portion of the TFR (residues 121–760) containing a hexa‐His tag has been expressed by baby hamster kidney (BHK) cells as a secreted entity. TFR has three Asn linked glycosylation sites at position 251, 317 and 727. To prevent glycosylation at each site, three single point mutants in which Asn is mutated to Asp have been constructed. For wild type (WT), N251D and N727D TFR a maximum of 40 mg/L is produced, whereas maximum production of the N317D TFR mutant is considerably lower. Characterization of the WT and the mutant TFR constructs includes analysis by mass spectrometry and estimation of binding constants for interaction with diferric TF, monoferric TF C‐lobe (Fe C ‐TF) and a Fe C ‐TF mutant. Additionally the rate of iron release from Fe C ‐TF in the presence and absence of the various TFR constructs has been determined. The N317D TFR mutant binds more weakly to Fe C ‐TF and shows a reduced ability to stimulate the release of iron from Fe C ‐TF at pH 5.6 compared to WT TFR and the other two mutants. A structural basis for these findings is presented. This work was supported by USPHS Grant R01 DK 21739 (ABM) and R01 GM061666 (IAK).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».