Genetically modified human type II collagen for N- and C-terminal covalent tagging
Notice bibliographique
Résumé
Collagen is the predominant structural protein in vertebrates, where it contributes to connective tissues and the ECM; it is also widely used in biomaterials and tissue engineering. Dysfunction of this protein and its processing can lead to a wide variety of developmental disorders and connective tissue diseases. Recombinantly engineering the protein is challenging due to post-translational modifications generally required for its stability and secretion from cells. Introducing end labels into the protein is problematic, because the N- and C-termini of the physiologically relevant tropocollagen lie internal to the initially flanking N- and C-propeptide sequences. Here, we introduce mutations into human type II procollagen in a manner that addresses these concerns and purify the recombinant protein from a stably transfected HT1080 human fibrosarcoma cell line. Our approach introduces chemically addressable groups into the N- and C-telopeptide termini of tropocollagen. Simultaneous overexpression of formylglycine generating enzyme (FGE) allows the endogenous production of an aldehyde tag in a defined, substituted sequence in the N terminus of the mutated collagen, whereas the C-terminus of each chain presents a sulfhydryl group from an introduced cysteine. These modifications are designed to enable specific covalent end-labelling of collagen. We find that the doubly mutated protein folds and is secreted from cells. Higher order assembly into well-ordered collagen fibrils is demonstrated through transmission electron microscopy. Chemical tagging of thiols is successful; however, background from endogenous aldehydes present in wild-type collagen has thus far obscured the desired specific N-terminal labelling. Strategies to overcome this challenge are proposed.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».