A lentiviral system for efficient knockdown of proteins in neuronal cultures
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
We have devised a protocol for highly efficient and specific knockdown of proteins in neuronal cultures. Small hairpin RNAs (shRNAs) are embedded into a microRNA (miRNA) context by oligo annealing to create shRNAmiRs, which are expressed from within the 3'-UTR of a reporter protein. This reporter protein/synthetic miRNA cassette is transferred to a targeting vector and lentivirus is produced in HEK-293-T cells following co-transfection of the targeting vector with three additional vectors encoding essential lentiviral proteins. Mature virus is harvested by collecting culture medium from transfected HEK-293-T cells, the virus is purified by centrifugation, and virus titers are determined prior to addition to neuronal cultures. Near 100% transduction efficiency of cultured hippocampal neurons is routinely observed and allows for the population-wide inhibition of target protein expression and the simultaneous knockdown of multiple proteins with little or no toxicity. The lentivirus generated can be used for protein knockdown in multiple neuronal culture models and at a variety of developmental stages. The steps from shRNAmiR design to ready-to-use virus stocks can be completed in as little as two weeks.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle