Selection-free, high frequency genome editing by homologous recombination of human pluripotent stem cells using Cas9 RNP and AAV6
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Combination of genome editing and human pluripotent stem cells (hPSCs) offers a platform for in vitro disease modeling, drug discovery and personalized stem cell therapeutics. However, incorporation of large modifications using CRISPR/Cas9-based genome editing in hPSCs typically requires the use of selection markers due to low editing efficiencies. Here we report a novel editing technology in hPSCs using Cas9 protein complexed with chemically modified single guide RNA (sgRNA) and recombinant AAV6 (rAAV6) vectors for donor delivery without marker selection. With these components, we demonstrate targeted integration of a 2.2 kb DNA expression cassette in hPSCs at frequencies up to 94% and 67% at the HBB and MYD88 loci, respectively. We used this protocol to correct the homozygous sickle cell disease (SCD) mutation in an iPSC line derived from a SCD patient with a frequency of 63%. This Cas9/AAV6 system allows for both the integration of large gene cassettes and the creation of single nucleotide changes in hPSCs at high frequencies, eliminating the need for multiple editing steps and marker selection, thus increasing the potential of editing human pluripotent cells for both research and translational applications.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».