Evaluation of a noncanonical Cys40‐Cys55 disulfide linkage for stabilization of single‐domain antibodies
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Incorporation of noncanonical disulfide linkages into single‐domain antibodies (sdAbs) has been shown to enhance thermostability and other properties. Here, we evaluated the effects of introducing a novel disulfide linkage formed between Cys residues at IMGT positions 40 and 55 on the melting temperatures ( T m s), reversibility of thermal unfolding, solubility, and antigen‐binding affinities of three types of sdAbs (V H H, V H , and V L domains). The Cys40‐Cys55 disulfide linkage was tolerated by 9/9 V H Hs, 12/12 V H s, and 2/11 V L s tested and its formation was confirmed by mass spectrometry. Using circular dichroism, we found that the Cys40‐Cys55 disulfide linkage increased sdAb T m by an average of 10.0°C (range: 0–21.8°C). However, enhanced thermostability came at the cost of a partial loss of refolding ability upon thermal denaturation as well as, for some sdAbs, significantly decreased solubility and antigen‐binding affinity. Thus, Cys40/Cys55 can be added to the panel of known locations for introducing stabilizing noncanonical disulfide linkages into antibody variable domains, although its effects should be tested empirically for individual sdAbs.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,004 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».