Detection and quantification of free sulfhydryls in monoclonal antibodies using maleimide labeling and mass spectrometry
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
The detection of free sulfhydryls in proteins can reveal incomplete disulfide bond formation, indicate cysteine residues available for conjugation, and offer insights into protein stability and structure. Traditional spectroscopic methods of free sulfhydryl detection, such as Ellman’s reagent, generally require a relatively large amount of sample, preventing their use for the analysis of biotherapeutics early in the development cycle. These spectroscopic methods also cannot accurately determine the location of the free sulfhydryl, further limiting their utility. Mass spectrometry was used to detect free sulfhydryl residues in intact proteins after labeling with Maleimide-PEG2-Biotin. As little as 2% cysteine residues with free sulfhydryls (0.02 mol SH per mol protein) could be detected by this method. Following reduction, the free sulfhydryl abundance on antibody heavy and light chains could be measured. To determine free sulfhydryl location at peptide-level resolution, free sulfhydryls and cysteines involved in disulfide bonds were differentially labeled with N-ethylmaleimide and d5-N-ethylmaleimide, respectively. Following enzymatic digestion and nanoLC-MS, the abundance of free sulfhydryls at individual cysteine residues was quantified down to 2%. The method was optimized to avoid non-specific labeling, disulfide bond scrambling, and maleimide exchange and hydrolysis. This new workflow for free sulfhydryl analysis was used to measure the abundance and location of free sulfhydryls in 3 commercially available monoclonal antibody standards (NIST Monoclonal Antibody Reference Material (NIST), SILu™Lite SigmaMAb Universal Antibody Standard (Sigma-Aldrich) and Intact mAb Mass Check Standard (Waters)) and 1 small protein standard (β-Lactoglobulin A).
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle