Generation of High-Titer Self-Inactivated γ-Retroviral Vector Producer Cells
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
The γ-retroviral vector is a gene delivery vehicle that is commonly used in gene therapy. Despite its efficacy, its strong enhancers contributed to malignant transformations in some hematopoietic stem cell (HSC) gene therapy trials. A safer version without viral enhancers (SIN) is available, but its production is cumbersome, as high titers can only be obtained in transient transfection. Our aim was to develop a system that could easily generate high-titer SIN vectors from stable producer cells. The use of the cytomegalovirus enhancer-promoter sequence to generate the full-length genomic RNA combined to sequences that decrease transcriptional readthrough (WPRE and strong polyadenylation sequences) led to 6 × 106 infectious units (IU)/mL of a SIN GFP vector in transient transfection. The incorporation of a blasticidin selection cassette to the retroviral plasmid allowed the generation of stable clones in the 293Vec packaging cells that release 2 × 107 IU/mL and 1.4 × 107 IU/mL of a SIN GFP and a SIN PIGA vector, respectively. A titer of 1.8 × 106 IU/mL was obtained with a SIN vector containing the long 8.9-kb COL7A1 cDNA. Thus, an efficient process was established for the generation of stable 293Vec-derived retrovirus producer cells that release high-titer SIN vectors. The γ-retroviral vector is a gene delivery vehicle that is commonly used in gene therapy. Despite its efficacy, its strong enhancers contributed to malignant transformations in some hematopoietic stem cell (HSC) gene therapy trials. A safer version without viral enhancers (SIN) is available, but its production is cumbersome, as high titers can only be obtained in transient transfection. Our aim was to develop a system that could easily generate high-titer SIN vectors from stable producer cells. The use of the cytomegalovirus enhancer-promoter sequence to generate the full-length genomic RNA combined to sequences that decrease transcriptional readthrough (WPRE and strong polyadenylation sequences) led to 6 × 106 infectious units (IU)/mL of a SIN GFP vector in transient transfection. The incorporation of a blasticidin selection cassette to the retroviral plasmid allowed the generation of stable clones in the 293Vec packaging cells that release 2 × 107 IU/mL and 1.4 × 107 IU/mL of a SIN GFP and a SIN PIGA vector, respectively. A titer of 1.8 × 106 IU/mL was obtained with a SIN vector containing the long 8.9-kb COL7A1 cDNA. Thus, an efficient process was established for the generation of stable 293Vec-derived retrovirus producer cells that release high-titer SIN vectors.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle