Three Optimized Methods for In Situ Quantification of Progenitor Cell Proliferation in Embryonic Kidneys Using BrdU, EdU, and PCNA
Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: Nephron progenitor cells derived from the metanephric mesenchyme undergo a complex balance of self-renewal and differentiation throughout kidney development to give rise to the mature nephron. Cell proliferation is an important index of progenitor population dynamics. However, accurate and reproducible in situ quantification of cell proliferation within progenitor populations can be technically difficult to achieve due to the complexity and harsh tissue treatment required of certain protocols. OBJECTIVE: To optimize and compare the performance of the 3 most accurate S phase-specific labeling methods used for in situ detection and quantification of nephron progenitor and ureteric bud cell proliferation in the developing kidney, namely, 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), 5-ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU), and proliferating cell nuclear antigen (PCNA). METHODS: Protocols for BrdU, EdU, and PCNA were optimized for fluorescence labeling on paraformaldehyde-fixed, paraffin-embedded mouse kidney tissue sections, with co-labeling of nephron progenitor cells and ureteric bud with Six2 and E-cadherin antibodies, respectively. Image processing and analysis, including quantification of proliferating cells, were carried out using free ImageJ software. RESULTS: All 3 methods detect similar ratios of nephron progenitor and ureteric bud proliferating cells. The BrdU staining protocol is the lengthiest and most complex protocol to perform, requires tissue denaturation, and is most subject to interexperimental signal variability. In contrast, bound PCNA and EdU protocols are relatively more straightforward, consistently yield clear results, and far more easily lend themselves to co-staining; however, the bound PCNA protocol requires substantive additional postexperimental analysis to distinguish the punctate nuclear PCNA staining pattern characteristic of proliferating cells. CONCLUSIONS: All 3 markers exhibit distinct advantages and disadvantages in quantifying cell proliferation in kidney progenitor populations, with EdU and PCNA protocols being favored due to greater technical ease and reproducibility of results associated with these methods.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,004 | 0,004 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,003 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,004 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».