Recombinant expression of <i>Aspergillus niger</i> GH10 endo‐xylanase in <i>Pichia pastoris</i> by constructing a double‐plasmid co‐expression system
Notice bibliographique
Résumé
Abstract BACKGROUND Previous work has shown that GH10 endo‐xylanase presented better synergistic cooperation with cellulase to achieve effective hydrolysis. However, most currently reported commercial xylanolytic enzymes from Aspergillus niger belong to GH11 and there have been few studies regarding GH10 xylanase. In addition, to increase overall expression of heterologous endo‐xylanase in Pichia pastoris, a double‐plasmid co‐expression method, including the construction of recombinant P. pastoris using one expression vector followed by inserting another vector which targeted to different locus, was introduced. RESULTS A GH10 xylanase gene from A. niger BE‐2 (XynC) was optimized and constitutively expressed in P. pastoris GS115. Compared with the conventional single‐plasmid method, it appeared that the double‐plasmid strategy could considerably increase the XynC yield by ∼33%. To further improve enzyme production, cultivation conditions were optimized at shake‐flask level and then scaled up to a 5‐L bioreactor. Through high cell‐density fermentation, the expression level of GH10 XynC reached 1650 U mL−1. The XynC showed maximum activity at 55 °C and pH 5.0, and exhibited an excellent stability over a wide range of pH from 4.5 to 7.0. The kinetic parameters Km and Vmax values for beechwood xylan were 3.5 mg mL−1 and 2327 U mg−1, respectively. CONCLUSION The double‐plasmid co‐expression strategy introduced herein could greatly improve the XynC yield in P. pastoris. The GH10 xylanase from A. niger BE‐2 shared similar reaction conditions with the existing enzymatic hydrolysis, which might be a good candidate to assist cellulases for industrial application. © 2019 Society of Chemical Industry
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».