Aptamer Binding Assay for the E Antigen of Hepatitis B Using Modified Aptamers with G-Quadruplex Structures
Notice bibliographique
Résumé
The e antigen of hepatitis B (HBeAg) is positively associated with an increased risk of developing liver cancer and cirrhosis in chronic hepatitis B (CHB) patients. Clinical monitoring of HBeAg provides guidance to the treatment of CHB and the assessment of disease progression. We describe here an affinity binding assay for HBeAg, which takes advantage of G-quadruplex aptamers for enhanced binding and stability. We demonstrate a strategy to improve the binding affinity of aptamers by modifying their sequences upon their G-quadruplex and secondary structures. On the basis of predicting a stable G-quadruplex and a secondary structure, we truncated 19 nucleotides (nt) from the primer regions of an 80-nt aptamer, and the resulting 61-nt aptamer enhanced binding affinity by 19 times (Kd = 1.2 nM). We mutated a second aptamer (40 nt) in one loop region and incorporated pyrrolo-deoxycytidine to replace deoxycytidine in another loop. The modified 40-nt aptamer, with a stable G-quadruplex and two modified loops, exhibited a 100 times higher binding affinity for HBeAg (Kd = 0.4 nM) than the unmodified original aptamer. Using the two newly modified aptamers, one serving as the capture and the other as the reporter, we have developed an improved sandwich binding assay for HBeAg. Analyses of HBeAg in serum samples (concentration ranging from 0.1 to 60 ng/mL) of 10 hepatitis B patients, showing consistent results with clinical tests, demonstrate a successful application of the aptamer modification strategy and the associated aptamer binding assay.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».