A sensitive assay for dNTPs based on long synthetic oligonucleotides, EvaGreen dye and inhibitor-resistant high-fidelity DNA polymerase
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
Deoxyribonucleoside triphosphates (dNTPs) are vital for the biosynthesis and repair of DNA. Their cellular concentration peaks during the S phase of the cell cycle. In non-proliferating cells, dNTP concentrations are low, making their reliable quantification from tissue samples of heterogeneous cellular composition challenging. Partly because of this, the current knowledge related to the regulation of and disturbances in cellular dNTP concentrations derive mostly from cell culture experiments with little corroboration at the tissue or organismal level. Here, we fill the methodological gap by presenting a simple non-radioactive microplate assay for the quantification of dNTPs with a minimum requirement of 4-12 mg of biopsy material. In contrast to published assays, this assay is based on long synthetic single-stranded DNA templates (50-200 nucleotides), an inhibitor-resistant high-fidelity DNA polymerase, and the double-stranded-DNA-binding EvaGreen dye. The assay quantified reliably less than 50 fmol of each of the four dNTPs and discriminated well against ribonucleotides. Additionally, thermostable RNAse HII-mediated nicking of the reaction products and a subsequent shift in their melting temperature allowed near-complete elimination of the interfering ribonucleotide signal, if present. Importantly, the assay allowed measurement of minute dNTP concentrations in mouse liver, heart and skeletal muscle.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle