Nimotuzumab Site-Specifically Labeled with 89Zr and 225Ac Using SpyTag/SpyCatcher for PET Imaging and Alpha Particle Radioimmunotherapy of Epidermal Growth Factor Receptor Positive Cancers
Notice bibliographique
Résumé
To develop imaging and therapeutic agents, antibodies are often conjugated randomly to a chelator/radioisotope or drug using a primary amine (NH2) of lysine or sulfhydryl (SH) of cysteine. Random conjugation to NH2 or SH groups can require extreme conditions and may affect target recognition/binding and must therefore be tested. In the present study, nimotuzumab was site-specifically labeled using ∆N-SpyCatcher/SpyTag with different chelators and radiometals. Nimotuzumab is a well-tolerated anti-EGFR antibody with low skin toxicities. First, ΔN-SpyCatcher was reduced using tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP), which was followed by desferoxamine-maleimide (DFO-mal) conjugation to yield a reactive ΔN-SpyCatcher-DFO. The ΔN-SpyCatcher-DFO was reacted with nimotuzumab-SpyTag to obtain stable nimotuzumab-SpyTag-∆N-SpyCatcher-DFO. Radiolabeling was performed with 89Zr, and the conjugate was used for the in vivo microPET imaging of EGFR-positive MDA-MB-468 xenografts. Similarly, ∆N-SpyCatcher was conjugated to an eighteen-membered macrocyclic chelator macropa-maleimide and used to radiolabel nimotuzumab-SpyTag with actinium-225 (225Ac) for in vivo radiotherapy studies. All constructs were characterized using biolayer interferometry, flow cytometry, radioligand binding assays, HPLC, and bioanalyzer. MicroPET/CT imaging showed a good tumor uptake of 89Zr-nimotuzumab-SpyTag-∆N-SpyCatcher with 6.0 ± 0.6%IA/cc (n = 3) at 48 h post injection. The EC50 of 225Ac-nimotuzumab-SpyTag-∆N-SpyCatcher and 225Ac-control-IgG-SpyTag-∆N-SpyCatcher against an EGFR-positive cell-line (MDA-MB-468) was 3.7 ± 3.3 Bq/mL (0.04 ± 0.03 nM) and 18.5 ± 4.4 Bq/mL (0.2 ± 0.04 nM), respectively. In mice bearing MDA-MB-468 EGFR-positive xenografts, 225Ac-nimotuzumab-SpyTag-∆N-SpyCatcher significantly (p = 0.0017) prolonged the survival of mice (64 days) compared to 225Ac-control IgG (28.5 days), nimotuzumab (28.5 days), or PBS-treated mice (30 days). The results showed that the conjugation and labeling using SpyTag/∆N-SpyCatcher to nimotuzumab did not significantly (p > 0.05) alter the receptor binding of nimotuzumab compared with a non-specific conjugation approach. 225Ac-nimotuzumab-SpyTag-∆N-SpyCatcher was effective in vitro and in an EGFR-positive triple negative breast cancer xenograft model.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».