20 Quantification of sBCMA in human plasma using a high-throughput mass spectrometry workflow for exploratory, CAP/CLIA or regulated studies
Notice bibliographique
Résumé
Background Bioanalytically validated methods are needed for reliable measurement of B cell maturation antigen (BCMA) in clinical samples. BCMA contributes to multiple myeloma (MM) pathophysiology and is targeted by various novel immunotherapies. Soluble BCMA (sBCMA) is a promising novel biomarker for disease monitoring and prediction. To address the need for sBCMA measurement, we developed a mass spectrometry-based assays for the quantitation of total sBCMA in plasma. Methods Immunoaffinity enrichment of sBCMA from human plasma was performed on a Agilent AssayMap Bravo platform using streptavidin cartridges. Recovered sBCMA protein was digested to peptides using trypsin, spiked with a fixed level of stable isotope labeled (SIL) peptide standard, and analyzed by multiple-reaction-monitoring (MRM) mass spectrometry. The MRM assay targeted a BCMA-specific endogenous peptide used as a surrogate measure of the protein, as well as the corresponding spiked SIL peptide at known concentration. An 8-point external calibration curve was prepared by spiking varying amounts of recombinant BCMA and fixed amounts of SIL peptides in surrogate matrix. Endogenous sBCMA levels were determined by back-calculating against the curve. To assess the performance of the method, ≥ 2 precision and accuracy runs were performed. To assess the impact of ligand or drug binding on the developed assay, performance of the assay was tested using plasma spiked at a range of concentrations with rhAPRIL, rhBAFF or simulated mAb drug. Results The developed assay allowed the quantitation of sBCMA from 1 to 1000 ng/mL. The precision and accuracy at different QC levels was within 20% CV and 20% bias. The presence of binding proteins (rhAPRIL, rhBAFF, simulated mAb) did not interfere with the measurement of sBCMA indicating that the assay measures total sBCMA. Conclusions We have developed an assay for the absolute quantitation of total sBCMA in human plasma. The assay can be analytically validated and deployed for clinical studies with a ~ 3-day turnaround time.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,003 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».