Activity and substrate specificity of <i>Candida</i>, <i>Aspergillus</i>, and <i>Coccidioides</i> Tpt1: essential tRNA splicing enzymes and potential antifungal targets
Notice bibliographique
Résumé
The enzyme Tpt1 is an essential agent of fungal tRNA splicing that removes an internal RNA 2′-PO 4 generated by fungal tRNA ligase. Tpt1 performs a two-step reaction in which: (i) the 2′-PO 4 attacks NAD + to form an RNA-2′-phospho-(ADP-ribose) intermediate; and (ii) transesterification of the ADP-ribose O2″ to the RNA 2′-phosphodiester yields 2′-OH RNA and ADP-ribose-1″,2″-cyclic phosphate. Because Tpt1 does not participate in metazoan tRNA splicing, and Tpt1 knockout has no apparent impact on mammalian physiology, Tpt1 is considered a potential antifungal drug target. Here we characterize Tpt1 enzymes from four human fungal pathogens: Coccidioides immitis , the agent of Valley Fever; Aspergillus fumigatus and Candida albicans , which cause invasive, often fatal, infections in immunocompromised hosts; and Candida auris , an emerging pathogen that is resistant to current therapies. All four pathogen Tpt1s were active in vivo in complementing a lethal Saccharomyces cerevisiae tpt1 Δ mutation and in vitro in NAD + -dependent conversion of a 2′-PO 4 to a 2′-OH. The fungal Tpt1s utilized nicotinamide hypoxanthine dinucleotide as a substrate in lieu of NAD + , albeit with much lower affinity, whereas nicotinic acid adenine dinucleotide was ineffective. Fungal Tpt1s efficiently removed an internal ribonucleotide 2′-phosphate from an otherwise all-DNA substrate. Replacement of an RNA ribose-2′-PO 4 nucleotide with arabinose-2′-PO 4 diminished enzyme specific activity by ≥2000-fold and selectively slowed step 2 of the reaction pathway, resulting in transient accumulation of an ara-2′-phospho-ADP-ribosylated intermediate. Our results implicate the 2′-PO 4 ribonucleotide as the principal determinant of fungal Tpt1 nucleic acid substrate specificity.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
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