Artisanal Production of Prefusion-Stabilized SARS-CoV-2 Spikes v1
Notice bibliographique
Résumé
The two-part protocol presented here describes the establishment of a stable pool of 293-F cells expressing the HexaPro variant of the severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV2) spike (S) protein and its production and purification from the culture medium. CRISPR-Cas9-driven targeted integration of the expression cassette at the AAVS1 safe harborlocus streamlines cell line production. Engineered 293-F cells grown as suspension cultures in animal origin-free, chemically defined, protein-free medium allow purification to be performed directly from the culture medium with minimal cell processing steps. Yields of native and purified Spikes typically average 30-50 mg per liter of culture medium following tandem affinity purification using nickel-coupled and Strep-Tactin resins. Purified proteins bind recombinant ACE2 and mAb CR3022 in ELISA-based assays. Establishing an engineered cell line from cryopreserved 293-F cells takes approximately 4 weeks, and subsequent production and purification take between 9 and 14 days. As shown for the D614G mutation, this system can be readily adapted to study Spike variants.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,007 | 0,009 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».