Live whole-eye, ex vivo imaging and laser-induced micro injury of the corneal basal epithelium and visualization of resident macrophage responses
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Purpose In this paper, we describe a novel live-imaging approach to visualize the short-term response of the mouse cornea to basal epithelial cell damage. Laser scanning confocal microscopy was used to induce precisely-defined, localized corneal basal epithelial cell damage and the live macrophage response to this damage was visualized and analyzed. Methods Lipophilic fluorescent dyes, SGC5 or FM 4-64, were injected into the anterior chamber of enucleated eyes and imaged live in whole-mount using confocal laser scanning microscopy. Laser-induced damage was performed by focusing onto a defined region of the corneal basal epithelium for a brief period using a high laser power setting and then returning to low laser power for imaging. Eyes from CX3CR1 +/GFP mice were used to observe macrophage responses to laser damage in real-time. Results SGC5 or FM 4-64 dyes injected into the anterior chamber readily enter the cornea and are taken up by the stromal layer and labeled the outer membranes of corneal epithelial cells and remained stable when visualized using low laser power. Subjecting a defined region of the basal epithelium to high laser power for 1 minute or longer led to a rapid internalization of dye in the exposed basal epithelium cells and overall increase in cellular fluorescence. This change in fluorescence was also accompanied by cell swelling and contraction. Cellular internalization of the non-lipophilic, dye Alexa 647 hydrazide, indicated that membranes were compromised indicating that exposure to high power laser stimulation causes cellular damage to the basal epithelium. Visualization of corneal resident macrophages close to the site of laser-induced damage showed that within minutes, projecting macrophage filopodia extended towards the damaged region at a rate of 0.75µm/min for roughly 40 minutes. Conclusion We have developed a novel approach to image the live cornea and its response to damage. Laser-scanning confocal microscopy can be utilized to induce localized damage to mouse corneal basal epithelium and elicit a macrophage morphological response. This approach represents a useful tool for studying corneal wound healing and cellular responses to damage using live whole-mount imaging.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».