Caloxin 1c2: Experimental Evidence That It Binds Plasma Membrane Calcium Pump
Notice bibliographique
Résumé
We engineered caloxin 1c2, a novel high affinity peptide (TAWSEVLDLLRRGGGSK‐amide) inhibitor of the Plasma Membrane Ca 2+ pump (PMCA). To show that caloxin 1c2 acts by binding to the PMCA, we synthesized a photoreactive derivative 3Bpa‐caloxin 1c2 (TA(Bpa)SEVLDLLRRGGGSK‐biotin), containing the photoreactive residue Bpa (benzoylphenylalanine) and biotin. 3Bpa‐caloxin 1c2 inhibited the Ca 2+ ‐Mg 2+ ‐ATPase activity of PMCA. The human erythrocyte membranes were photolabeled with 3Bpa‐caloxin 1c2 and the proteins were detected in the Western blots using HRP‐streptavidin to identify biotin or PMCA antibodies to detect PMCA. The photolabeled erythrocyte membranes showed a 250–270 kDa doublet with HRP‐streptavidin. The degree of biotinylation of the erythrocyte membranes depended on the length of the cross‐linking time, and concentrations of 3Bpa‐caloxin 1c2 and the membrane protein. Immunoprecipitates from the photolabeled erythrocyte membranes using a PMCA antibody showed a 250–270 kDa doublet with HRP‐streptavidin. Biotinylated proteins isolated from the photolabeled erythrocyte membranes using captavidin also showed a 250–270 kDa doublet with HRP‐streptavidin and PMCA antibodies. Caloxin 1c2 had been selected for binding to the extracellular domain 1 (amino acids 115–131) of PMCA isoform 4. Caloxin 1c2 and the extracellular domain 1 peptide of PMCA 4 competed with 3Bpa‐caloxin 1c2 for photolabeling the erythrocyte membranes. Pieces of de‐endothelialized pig coronary artery cross‐linked to 3Bpa‐caloxin 1c2 and treated with Alexa‐streptavidin were examined by confocal microscopy, using the Na + ‐pump inhibitor Bodipy‐ouabain as a positive control. Both the probes bound to the cell surface. Thus, the photoreactive derivative of caloxin 1c2 binds to PMCA at the cell surface. Supported by Heart & Stroke Foundation of Ontario.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».