An optimal non-viral gene transfer method for genetically modifying porcine bone marrow-derived endothelial progenitor cells for experimental therapeutics
Notice bibliographique
Résumé
No currently available treatment is able to generate new contractile tissue or significantly improve cardiac function after myocardial infarction (MI), a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Although gene transfer-enhanced endothelial progenitor cells (GTE-EPCs) show effectiveness in MI treatment in small animal models, no clinical trials using GTE-EPCs have been documented. Before the introduction of GTE-EPCs into human trials, gene-transfer-mediated augmentation of EPC function in animal models that reflect the human MI scenario should be tested. In this regard, a porcine model is the best choice since pigs have cardiac size, hemodynamics and coronary anatomy similar to that of humans. To examine GTE-EPC therapeutic efficacy in pig MI models, an efficient method for gene transfer into pig EPCs is required, which however, has been poorly documented. Pig bone marrow mononuclear cells were isolated and cultured in EGM-2 medium to obtain bone marrow-derived EPCs (BM-EPCs) that were characterized by immunostaining and the tube formation assay. Gene transfer was optimized in 6-well plates using a GFP and a VEGF plasmid, and scaled up in T75 flasks. Gene transfer efficiency was determined by fluorescence microscopy and flow cytometry. VEGF levels were measured by ELISA. Cell proliferation was assayed by the CCK-8 kit. (1) BM-EPCs expressed VEGFR2 and eNOS but not CD45 protein, and formed tube structures on Matrigel; (2) several chemical compounds were explored with the highest transfection efficiency of 41.4% ± 5.8% achieved using Lipofectamine 3000; (3) the VEGF level in culture medium after VEGF transfection was 378 ± 48 ng/10 6 cells; and (4) BM-EPCs overexpressing VEGF had significantly enhanced proliferation than GFP-transfected EPCs. A simple, easy and cheap method that can be applied to produce a large number of genetically-modified BM-EPCs was established, which will facilitate the study of GTE-EPC therapeutic efficacy in pig MI model.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».