A21 OVEREXPRESSION OF <i>ASCL2</i> ALTERS DIFFERENTIATION IN ESOPHAGEAL ORGANOIDS
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background The first population of stem cells in the esophageal epithelium was recently identified with the marker Keratin 15 ( Krt15). However, little is known about the mechanisms underlying the expansion and the function of these stem cells. It was shown that the transcription factor ASCL2 is upregulated in Krt15+ cells compared to Krt15- cells. Interestingly, ASCL2 is a gene target of the Wnt/β-catenin pathway, which acts as a regulator of proliferation and maintenance of the stemness state. The ultimate goal of my research project is to determine the role of ASCL2 in the maintenance of esophageal stem cells and to identify its binding partners. Aims Investigate the role of ASCL2 in esophageal epithelial biology. Methods Lentiviral infection approach was used to obtain mouse esophageal organoids overexpressing ASCL2. Organoid culture, immunostaining (such as IF and H&E), qPCR, WB and proliferation assay were used to characterize the effect of ASCL2 overexpression on morphology, differentiation, proliferation, self-renewal and gene expression. Results First, ASCL2 overexpression was confirmed by WB. Interestingly, the morphology of organoid overexpressing ASCL2 was severely altered: organoids were smaller and less differentiated. Defect in differentiation was investigated by qPCR and IF using relevant markers such as p63, Krt13, Wnt5a and NT5E. Indeed, we observed an increase in basal marker ( p63), a decrease in suprabasal markers ( Krt13, Wnt5a) and in a stem cell marker ( NT5E). We also investigated the role of ASCL2 in self-renewal and observed that organoid formation capacity was reduced in ASCL2-overexpressing organoids. Furthermore, proliferation was also reduced in WST-1 assays. We also observed lower expression of the gene Top2a, a recently identified marker of the proliferative basal cell population in the human esophagus. Finally, we observed significant changes in the expression of genes associated with quiescent stem cells (Clu, ZFP36L2 and Anxa1). Conclusions ASCL2 overexpression alters differentiation and proliferation in organoids. ASCL2 could play a role in orchestrating cell fate decision in the esophageal epithelium. Funding Agencies NSERC, Canada Research Chair
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».