A63 THE COLONIC PATHOGEN, <i>ENTAMOEBA HISTOLYTICA</i> ACTIVATES CASPASE-4 IN HUMAN MACROPHAGES THAT CLEAVES GASDERMIN D TO FACILITATE IL-1β SECRETION IN THE ABSENCE OF CELL DEATH
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background A hallmark of Entamoeba histolytica ( Eh) invasion in the gut is acute intestinal inflammation dominated by the secretion of pro-inflammatory cytokines. Live Eh in contact with macrophages activates caspase-1 by the recruitment of the NLRP3 inflammasome in a Gal-lectin and Eh cysteine proteases 5 ( EhCP-A5)-dependent manner, resulting in the maturation and secretion of IL-1β. Eh in contact with macrophages also activates caspase-4 by outside-in signaling but it is unclear how Eh-induced caspase-1/4 regulates gasdermin D (GSDMD) cleavage to drive both pore formation and IL-1β secretion without causing cell death. In this study, we interrogated the requirements and mechanism of Eh-induced caspase-4 activation in cleaving GSDMD to mediate bioactive IL-1β release. Aims Hypothesis: Eh-induced activation of caspase-4 regulates GSDMD mediated pro-inflammatory responses. Specific aim: To quantify caspase-1/4 cleavage of GSDMD in Eh-induced pro-inflammatory responses. Methods Human PMA-differentiated THP-1 macrophages were used for Eh-macrophage studies. Caspase-1/4 activation and GSDMD cleavage were detected by immunoblot analysis. Bioactive IL-1β secretion was quantified by HEK-BlueTM IL-1β reporter cells via the measurement of secreted embryonic alkaline phosphatase (SEAP) and cell pyroptosis (inflammatory cell death) was determined by LDH assay. Immunoprecipitation was performed in HEK 293T cells transfected with human GSDMD plasmid followed by in vitro caspase cleavage assay. Results Unlike caspase-1, Eh-induced caspase-4 activation and IL-1β secretion was independent of the NLRP3 inflammasome as revealed with the use of CRISPR-Cas9 gene edited caspase-1, 4, ASC and NLRP3 macrophages. In the absence of caspase-1, caspase-4 activation was significantly upregulated that promoted the cleavage of GSDMD to induce robust IL-1β secretion. Eh-induced caspase-4 played a major role in triggering IL-1β release and GSDMD pore formation as quantified by SEAP assay and immunoprecipitation of overexpressed GSDMD in HEK 293T cells followed by in vitro caspase cleavage assay. Pharmacological inhibition of GSDMD pore formation and in CRISPR-Cas9 gene edited GSDMD macrophages, Eh-induced IL-1β secretion was highly dependent on GSDMD pore formation and independent of pyroptosis. This was in marked contrast to the positive control, LPS + Nigericin that induced high expression of caspase-1 but not caspase-4 that enhanced GSDMD cleavage and IL-1β secretion and induced massive pyroptosis. Conclusions These results suggest that Eh induced a state of “hyperactivated macrophages” that led to caspase-4 dependent GSDMD cleavage and IL-1β secretion in the absence of pyroptosis important in disease pathogenesis. Funding Agencies NSERC
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».