A Coumermycin/Novobiocin-Regulated Gene Expression System
Notice bibliographique
Résumé
Regulated expression of transgenes in mammals is an important technique in both functional genomic studies and clinical applications. Here we describe a regulated gene expression system for mammals, based on coumarin-switched dimerization of the bacterial DNA gyrase B subunit (GyrB). The transactivator was constructed by fusing the GyrB activator to the bacterial lambda repressor-binding domain. The antibiotic coumermycin in nanomolar concentrations activated the transgene through binding of the homodimerized chimeric transactivator to the lambda operator located upstream of a minipromoter. More significantly, addition of novobiocin, an antagonist of coumermycin, promptly switched off expression of the gene by abolishing coumermycin-induced dimerization of the transactivator. Site-directed mutagenesis of the lambda repressor-binding domain resulted in significant reduction of basal expression levels and an induction reaching four orders of magnitude in stably transfected 293A cells in response to coumermycin. The capability of this inducible system for tightly regulated gene expression was demonstrated by the ready generation of stable cell lines inducibly expressing the proapoptotic bax gene in mammalian cells. Hence, this novel coumarin switch-on/switch-off system should broaden the utility of regulated gene expression, particularly when rapid on/off interchange is required.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».