Diaphragm Satellite Cells Isolation by Optimized MACS and the Effect of Mechanical Ventilation on their Proliferation and Differentiation Characteristics through MyoD and Myogenin Pathways
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Objective: In the present study, we aimed to establish a feasible method to isolate single diaphragm satellite cells from C57 mice, and clarify the effect of mechanical ventilation (MV) on the proliferation and differentiation of diaphragm satellite cells. Moreover, the underlying molecular mechanism was also explored.Methods: After the dissection of the diaphragm, enzymolysis, and specific antibody selection, single diaphragm satellite cells were harvested from C57 mice receiving 6 h of MV or not with optimized magnetic-activated cell sorting (MACS) approach. The cells were stained with BrdU or labeled with the differentiation antibody MYH3, followed by observation using fluorescence microscopy. The cells were counted from randomly selected visual fields, and the proliferation or differentiation characteristics of the control and MV groups were compared by IMAGE software. Besides, the expressions of MyoD and myogenin were detected by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Results: The single diaphragm satellite cells were successfully purified through MACS using a set of optimized parameters. Generally speaking, 1.5×105 cells could be harvested from a single diaphragm. Upon MV, the proliferation rate of diaphragm satellite cells was decreased from 88.74% to 81.92%, while the differentiation rate was increased from 17.94% to 27.58%. Moreover, the expressions of MyoD and myogenin were significantly up-regulated upon MV. Conclusions: In our current work, an efficient method was successfully established to isolate single diaphragm satellite cells. After MV, the differentiation rate of diaphragm satellite cells tended to increase, and the expressions of MyoD and myogenin were up-regulated. Collectively, our findings provided valuable insights into further research and clinical target treatment.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».