Allele-Specific Inactivation of an Autosomal Dominant Epidermolysis Bullosa Simplex Mutation Using CRISPR-Cas9
Notice bibliographique
Résumé
Epidermolysis bullosa simplex (EBS) is a rare mechanobullous disease caused by dominant-negative mutations in either keratin 5 ( KRT5 ) or keratin 14 ( KRT14 ) genes. Until now, there is no cure for EBS and the care is primarily palliative. The discovery of the clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-Cas9 system raised hope for the treatment of EBS and many other autosomal dominant diseases by mutant allele-specific gene disruption. In this study, we aim to disrupt the mutant allele for the heterozygous EBS pathogenic variation c.449T>C (p.Leu150Pro) within KRT5 . This mutation generates, naturally, a novel protospacer-adjacent motif for the endonuclease Streptococcus pyogenes Cas9 . Thus, we designed a single-guide RNA that guides the Cas9 to introduce a DNA cleavage of the mutant allele in patient's keratinocytes. Then, transfected cells were single-cell cloned and analyzed by deep sequencing. The expression of KRT5 and KRT14 was quantified, and the keratin intermediate filament stability was assessed. Results showed successful stringent mutant allele-specific knockout. An absence of synthesis of mutant transcript was further confirmed indicating permanent mutant allele-specific inactivation. Edited EBS patient keratinocytes produced a lower amount of K5 and K14 proteins compared with nonedited EBS cells, and no disturbance of cellular properties was observed.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».