A genetically encoded far‐red fluorescent calcium ion biosensor derived from a biliverdin‐binding protein
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Far‐red and near‐infrared (NIR) genetically encoded calcium ion (Ca2+) indicators (GECIs) are powerful tools for in vivo and multiplexed imaging of neural activity and cell signaling. Inspired by a previous report to engineer a far‐red fluorescent protein (FP) from a biliverdin (BV)‐binding NIR FP, we have developed a far‐red fluorescent GECI, designated iBB‐GECO1, from a previously reported NIR GECI. iBB‐GECO1 exhibits a relatively high molecular brightness, an inverse response to Ca2+ with ΔF/Fmin = −13, and a near‐optimal dissociation constant (Kd) for Ca2+ of 105 nM. We demonstrate the utility of iBB‐GECO1 for four‐color multiplexed imaging in MIN6 cells and five‐color imaging in HEK293T cells. Like other BV‐binding GECIs, iBB‐GECO1 did not give robust signals during in vivo imaging of neural activity in mice, but did provide promising results that will guide future engineering efforts. Significance Genetically encoded calcium ion (Ca2+) indicators (GECIs) compatible with common far‐red laser lines (~630–640 nm) on commercial microscopes are of critical importance for their widespread application to deep‐tissue multiplexed imaging of neural activity. In this study, we engineered a far‐red excitable fluorescent GECI, designated iBB‐GECO1, that exhibits a range of preferable specifications such as high brightness, large fluorescence response to Ca2+, and compatibility with multiplexed imaging in mammalian cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».