High UV Excitation Intensity Induces Photoconversion of DAPI During Wide-Field Microscopy
Notice bibliographique
Résumé
Background: Multi-color fluorescence microscopy is dependent on the spectral specificity of the dyes and probes used for localization. One of the most commonly used fluorescent DNA dyes is DAPI, which is usually excited by UV light to emit in the blue visible light range. Herein, we describe a pattern of decreasing DAPI fluorescence upon extended UV exposure, closely followed by an increase in emission maxima in the green range. Methods: UV-induced photo-conversion of DAPI to green-fluorescing photoproducts was studied on Chinese hamster ovary cells using wide-field fluorescence microscopy, at different UV exposure times and intensities. Imaging was done in repetitive cycles, by alternating between a DAPI and FITC filter cube and following this with a 1 second UV excitation time. The effect of differing UV light intensities on the photo- conversion process was not previously described in the literature. Results: Upon image analysis from a large sample of cells, the rate of photo-conversion was shown to be dependent on both the duration of UV excitation and the intensity of the UV light source. Both the process of DAPI depletion and photo-product growth showed biphasic exponential patterns of change. Furthermore, the level of DAPI fluorescence intensity was found to be negatively correlated with the green fluorescence of the photo-product. Limitations: This study did not examine the effect of differing mounting media or a variation in DAPI concentration on the rate of DAPI photo-conversion. Also, the exact light dosage to the system was not measured from the 100W Hg bulb. Photo-bleaching of green fluorescence in cells not stained with DAPI was not measured to control for bleaching of endogenous cell molecules. Conclusion: Based on our findings, a set of recommendations was formulated in order to help reduce the effects of UV-induced DAPI photo-conversion.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».