Methods for Recombinant Production and Purification of Peptides as SUMO‐Peptide‐Intein Fusion Proteins to Protect from Degradation
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
Heterologous expression in Escherichia coli is a commonly used method to produce ribosomally synthesized peptides for further study. This generally requires expression of the target protein with an affinity fusion tag, followed by isolation of the fusion protein from a cellular lysate by affinity purification, and finally by removal of the fusion tag and purification of the desired peptide. Sometimes, however, fusion proteins may be degraded during recombinant expression in E. coli. We recently reported an expression system that sandwiches the target peptide between an N-terminal small ubiquitin-like modifier (SUMO) protein and a C-terminal intein. This SUMO-peptide-intein (SPI) fusion protein protects the central peptide from degradation and can lead to improved peptide yield after purification. In this report, we detail the cloning, expression, and isolation procedures for the SPI fusion system, with comments on conditions that can be optimized for different peptides to obtain maximal yield for each construct. © 2022 Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol 1: Cloning to construct SPI gene Basic Protocol 2: Expression of SPI fusion proteins in E. coli BL21(DE3) Support Protocol: Optimization of expression and induction conditions Basic Protocol 3: Isolation and purification of SPI fusion proteins with a chitin column Alternate Protocol: Isolation and purification of SPI fusion proteins without chitin.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle