Abstract 530: Identification Of The Specific Residue In Apolipoprotein(a) Responsible For Mediating Covalent Attachment Of Oxidized Phospholipids
Notice bibliographique
Résumé
Oxidized phospholipids (oxPL) are highly inflammatory molecules that are linked to atherogenesis. Previously, Lp(a) was identified as the major carrier of oxPL in human plasma, with the majority of the oxPL being covalently associated to its apolipoprotein(a) (apo(a)) component. Earlier work by our group identified the Kringle (K) IV 10 domain of apo(a) as the site of oxPL binding; additionally, mutation of the strong lysine binding site (sLBS) in this domain eliminated oxPL addition. However, the specific residue(s) in apo(a) that bind oxPL remain elusive. In this study, we used site-directed mutagenesis of KIV 10 to identify the key residue of apo(a) involved in covalent attachment of oxPL and induction of inflammatory responses in vitro . Specifically, two residues in KIV 10 capable of binding oxPL by a Michael addition reaction (His 31 and 33) were identified as the probable sites of attachment. We mutagenized the residues to aspartic acid (Asp) and asparagine (Asn), respectively, based on the presence of these residues at these positions in plasminogen kringles. Six-kringle (6K) apo(a) variants harbouring these mutations were expressed in human embryonic kidney 293 cells and purified using lysine-Sepharose chromatography. Covalent oxPL modification of each apo(a) variant was assessed by E06 immunoblotting. Wild-type (WT) 6K and 6KHis31Asp were detected by E06 whereas 6KHis33Asn and 6KAsp56Ala (the LBS mutant) were not. Next, THP-1 macrophages were treated for 4 hours with 300 nmol/L of WT 6K apo(a), 6KHis33Asn, or 6KAsp56Ala. Expression of mRNA encoding the pro-inflammatory cytokine IL-8 by THP-1 cells was measured with quantitative real-time PCR. Relative to control, WT 6K apo(a) treatment of THP-1 cells significantly increased expression of IL8 (2.32-fold; p<0.001). Treatment of THP-1 cells with 6KHis33Asn or 6KAsp56Ala apo(a) did not significantly affect IL8 expression. We have thus identified the site of covalent attachment of oxPL to apo(a) as His33 in KIV 10 and we demonstrate that apo(a)-induced inflammatory responses in macrophages are abolished when oxPL binding is prevented through mutation of this residue. These findings provide avenues for development of therapeutics to potentially mitigate Lp(a)-mediated atherogenesis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».