Robust serum-free expansion of human B cells with an animal component-free cell culture supplement
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Human B cells are utilized in workflows for discovering therapeutic antibodies and in the developing field of cellular therapy. The ability to expand the B cell population in blood samples from pathogen-exposed or naive patients offers the opportunity to improve the recovery of antibody sequences, increase the diversity of the B cell repertoire, or achieve de novo immunization in vitro. It can be difficult, however, to obtain robust expansion of B cells in cultures. Addition of serum improves performance, albeit with high lot-to-lot variability, and introduces the risk of contamination by adventitious agents. We have developed an animal component-free (ACF) supplement for culturing human B cells that does not require the use of serum, feeder cells, or specialized culture plates to achieve robust in vitro expansion. The ACF supplement is a 50X concentrate comprising non-animal-derived recombinant proteins and factors that can be added to a suitable base medium of choice to promote B cell activation and expansion. Human pan-B cells isolated from peripheral blood mononuclear cells (leukopaks) by immunomagnetic enrichment could be cultured and expanded in standard 24-well tissue culture plates for over 30 days, starting with seeding densities of 1 × 105 cells/well and passaging every few days from day 7 (± 1 day) onwards. Though pronounced inter-donor cell variability was observed in the rate of proliferation, an average ~55-fold, ~110-fold and ~160-fold expansion of viable B cells was obtained after 7, 11 and 14 days of culture, respectively (n = 21 donors; range 27- to 1090-fold at day 14 ± 1 day). Differentiation to plasma cells was apparent by flow cytometric analysis of CD138 and CD20.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».