Sequencing, cloning and expression of the panfilovirus glycoprotein specific recombinant mAb 8C12F11 in a CHO mammalian cell line
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background Point-of-care diagnostics are a pivotal component of the medical counter-measures against natural outbreaks or bioterror attacks of Class A pathogens. We previously identified and patented conserved B cells of filovirus glycoproteins for diagnostic, therapeutic and subunit vaccine R & D. In recent in-vitro studies, we validated three mAbs as components of an effective sandwich combo for the capture & detection of zaire ebolavirus (EBOV) species. This work describes the gene sequences and methods for the cloning and expression of a recombinant anti-peptide 2 mAb (8C12F11) in CHO mammalian cells towards faster recombinant in-bulk production in-vitro relative to mice-hybridoma generation in-vivo. Methods Mice hybridoma were prepared & cultured on modified dulbecco's eagle’s medium (MDEM) Total RNA was extracted using RNA-easy isolation reagent (Vazyme), and reverse transcribed into cDNA using SMARTScribe reverse transcriptase. Antibody fragments of heavy (H) and light (L) chains were amplified by rapid amplification of cDNA ends (RACE) and cloned into standard vectors for screening in 5 colonies. Inserts of matching phenotypic colonies were sequenced by Sanger capillary sequencing and aligned by IMGT analysis of VDJ. Isotyping was done by constant region analysis. Results Consensus sequences of the coding DNA of the heavy and light chains of an isotype IgG1/kappa recombinant mice mAb (Genbank accession #s OP966766 and OP966767, respectively) are presented. The biophysical profile of the full expressed recombinant mAb demonstrates a single protein of approximately 142 kda under non reducing conditions and tetramer of duplexes of 23ka and 48kda, respectively. The average area under sec-HPLC curve at a wavelength of 280 nm is 2490.55 Conclusions This work summarizes the first ever gene sequencing, cloning, and expression of the recombinant panfilovirus mAb 8C12F11 in a CHO mammalian cell line
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».