Use of Epivolve phage display to generate a monoclonal antibody with opsonic activity directed against a subdominant epitope on extracellular loop 4 of <i>Treponema pallidum</i> BamA (TP0326)
Notice bibliographique
Résumé
ABSTRACT Syphilis, a sexually transmitted infection caused by the spirochete Treponema pallidum ( Tp ), is resurging globally. Opsonic antibodies (Abs) targeting surface-exposed epitopes of the spirochete’s outer membrane proteins (OMPs) are believed to promote macrophage-mediated clearance of the bacterium during infection and are presumed to be key to vaccine development. Tp ’s repertoire of outer membrane proteins includes BamA (β- b arrel a ssembly m achinery subunit A /TP0326), the central component of the molecular machine that inserts newly exported OMP precursors into the OM lipid bilayer. BamA is a bipartite protein consisting of an 18-stranded β-barrel with nine extracellular loops (ECLs) and five periplasmic POTRA ( po lypeptide tr ansport- a ssociated) domains. Antisera directed against BamA ECL4 promote internalization of Tp by rabbit peritoneal macrophages. Herein, we employed a novel two-stage, phage display strategy, termed “Epivolve” (for epi tope evol ution), to generate five site-directed murine monoclonal Abs (mAbs) targeting a centrally located peptide (S2) of BamA ECL4. Each of the five mAbs demonstrated reactivity by immunoblotting and ELISA to nanogram amounts of BamA ECL4 displayed by a Pyrococcus furiosus thioredoxin ( Pf Trx) scaffold ( Pf Trx BamA/ECL4 ). One mAb containing a unique amino acid sequence in both light and heavy chains showed activity in an opsonophagocytosis assay employing murine bone marrow-derived macrophages. Mice and rabbits hyperimmunized with Pf Trx BamA/ECL4 produced opsonic antisera that strongly recognized the ECL presented in a heterologous scaffold and overlapping ECL4 peptides including S2. In contrast, Abs generated during Tp infection of mice and rabbits poorly recognized the peptides, indicating that S2 contains a subdominant epitope. Epivolve, which circumvents the natural immune response, can be utilized for the generation of mAbs that target subdominant opsonic epitopes in ECLs of Tp OMPs.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».