Western Blotting with Fast SDS‐PAGE and Semi‐Dry Protein Transfer
Notice bibliographique
Résumé
Western blotting is a method widely used in cell and molecular biology for the specific detection of proteins in biological samples. It is time-consuming and normally takes up to 2 days to complete. This protocol introduces a more time-efficient method to complete western blots, covering the preparation of protein extracts (including strategies for solubilization), electrophoretic separation of proteins, transfer of proteins to the membrane, and probing with antibodies. We describe an SDS-PAGE protocol that achieves a gradient-like separation of proteins (10-400 kDa) on a single-percentage polyacrylamide gel in only 45 min. Additionally, we present a rapid (10-14 min) semi-dry transfer of proteins from standard Tris/glycine polyacrylamide gels onto a membrane using homemade Tris/HEPES- or Tris/EPPS-based buffers. © 2023 Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol 1: Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) Support Protocol 1: Cell lysis and protein extraction Support Protocol 2: Protein quantification with BCA assay and sample preparation for loading on gel Basic Protocol 2: Protein transfer with a fast semi-dry transfer (FSDT) buffer Basic Protocol 3: Immunoprobing, chemiluminescent visualization, stripping, and reuse of membranes.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,005 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,006 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,005 | 0,003 |
| Bibliométrie | 0,005 | 0,005 |
| Études des sciences et des technologies | 0,002 | 0,002 |
| Communication savante | 0,002 | 0,003 |
| Science ouverte | 0,005 | 0,002 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,005 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,022 | 0,025 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».