Design of a novel affinity probe using the cell wall-binding domain of a <i>Listeria monocytogenes</i> autolysin for pathogen detection
Notice bibliographique
Résumé
ABSTRACT Rapid identification of foods and food-processing environments contaminated with Listeria monocytogenes is crucial for controlling human listeriosis, a leading cause of fatality related to foodborne illnesses. The L. monocytogenes autolysin IspC anchors to the bacterial surface non-covalently via its C-terminal cell wall-binding domain (CWBD), which contains conserved Gly-Trp (GW) dipeptides. This study explored the binding property of CWBD IspC to design an affinity probe for detecting L. monocytogenes . Immunogold electron microscopy analysis of a ∆ ispC mutant and its wild type (WT) revealed that exogenously added CWBD IspC bound to surface ligands that were evenly distributed and remained mostly unoccupied in the wild type. CWBD IspC detected, via recognizing the cell wall component lipoteichoic acid, L. monocytogenes strains primarily belonging to the serotype 4 group, as well as Listeria innocua , and Listeria welshimeri but did not detect three other Listeria spp. ( Listeria seeligeri , Listeria ivanovii, and Listeria grayi ) nor any non- Listeria spp. tested. CWBD IspC , when tagged with the enhanced green fluorescent protein, was capable of detecting L. monocytogenes by fluorescence microscopy, a colony lift filter assay, and a microtube binding assay. CWBD IspC , when covalently attached to magnetic beads, showed the ability to separate L. monocytogenes cells with a maximum capture rate of 90 to nearly 100% from 1 × 10 3 to 1 × 10 5 target cells. This study demonstrated for the first time that the CWBD derived from a GW surface protein IspC is a novel antibody alternative for the rapid detection and isolation of L. monocytogenes despite binding to two other Listeria species. IMPORTANCE Human listeriosis is caused by consuming foods contaminated with the bacterial pathogen Listeria monocytogenes , leading to the development of a severe and life-threatening foodborne illness. Detection of L. monocytogenes present in food and food processing environments is crucial for preventing Listeria infection. The L. monocytogenes peptidoglycan hydrolase IspC anchors non-covalently to the bacterial surface through its C-terminal cell wall-binding domain (CWBD), CWBD IspC . This study explored the surface binding property of CWBD IspC to design, construct, characterize, and assess an affinity molecular probe for detecting L. monocytogenes . CWBD IspC recognized a cell wall ligand lipoteichoic acid that remains evenly displayed and mostly unoccupied on the bacterial surface for interaction with the exogenously added CWBD IspC . CWBD IspC , when fused to the enhanced green fluorescent protein reporter or covalently conjugated onto magnetic beads, exhibited the functionality as an antibody alternative for rapid detection and efficient separation of the pathogen.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».