A role for Sarcolemmal Membrane‐Associated Protein (SLMAP) in mediating autophagy in endothelial cells through an AMPK‐dependent mechanism
Notice bibliographique
Résumé
Objective Sarcolemmal membrane associated protein (SLMAP) belongs to the superfamily of tail‐anchored membrane proteins and is a component of endoplasmic reticulum (ER)/sarcoplasmic reticulum as well as mitochondria, cell surface membranes and the nuclear envelope. It has been reported to be involved in various physiological functions mainly in, for example, the regulation of ion channels, membrane fusion and vesicle transport. Previously, we have shown that the up‐regulation of SLMAP protein in diabetic db/db and Tally Ho mice was linked to endothelial dysfunction; however, until now no mechanistic evidence has been provided as to how an up‐regulation of SLMAP disrupts endothelial function in type 2 diabetes mellitus. The primary objective for the current study was to elucidate the cellular pathway(s) whereby an overexpression of SLMAP in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) results in endothelial dysfunction. Materials and Methods HUVECs were cultured in M199 medium (Sigma Aldrich, USA) supplemented with 15% FBS, heparin (0.1% of 100mg/ml), ECGS (0.01% of 100 mg/ml), 100 μg/mL penicillin, and 100 U/mL streptomycin, at 37°C in a 5% CO 2 —95% air‐humidified incubator. The 41kDa isoform of SLMAP was overexpressed in HUVECs using SLMAP Lentiviral particles designed for humans (Accession number: AF304450.1; Genecopoeia), and SLMAP was partially knocked using small hairpin RNA (shRNA) lentiviral particles for humans (Santa Cruz Biotechnology, Catalogue number: sc‐78464‐V). The procedures were performed according to the manufacturer's instructions using polybrene at a concentration of 5μg/ml. After overexpression, the HUVECs were treated with, or without, the AMP‐activated protein kinase activator (AMPK), AICAR, 500μM, for 24 h. Protein markers of apoptosis, oxidative stress and autophagy were evaluated by Western Blotting, FACS, DHE staining and immunofluorescence techniques respectively. Results The ER chaperone protein, GRP78; the unfolded protein response (UPR) signaling proteins, such as IRE‐1α, PERK, XBP1s, cleaved caspase‐3, p‐JNK, Bcl‐XL; and markers of autophagy, such as LC3B‐II, Beclin‐1 were found to be significantly elevated ( p<0.05 ), while protein levels of p‐AMPKα ( Thr172 ) and SERCA2 were significantly decreased ( p<0.05 ) in HUVECs overexpressed with SLMAP. Interestingly, treatment with the AMPK activator, AICAR, significantly ( p<0.05 ) reversed all of the changes in HUVECs overexpressed with SLMAP. Moreover, the partial knock down of SLMAP significantly reduced IRE‐1α, PERK, XBP1s, p‐JNK, Bcl‐XL, LC3B‐II, Beclin‐1 proteins level, and increased p‐AMPKα ( Thr172 ) and SERCA2 proteins level in SLMAP shRNA‐transfected HUVECs. Conclusion Collectively, this study has demonstrated for the first time that changes in the expression of SLMAP protein (41kDa) play an important role in ER stress and autophagy in endothelial cells via an AMPK‐dependent mechanism. Support or Funding Information This abstract is part of the project funded by NPRP: 5‐149‐3‐040
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».