Delivery of <scp>AKT1</scp> phospho‐forms to human cells reveals differential substrate selectivity
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Protein kinase B (AKT1) is a serine/threonine kinase that regulates fundamental cellular processes, including cell survival, proliferation, and metabolism. AKT1 activity is controlled by two regulatory phosphorylation sites (Thr308, Ser473) that stimulate a downstream signaling cascade through phosphorylation of many target proteins. At either or both regulatory sites, hyperphosphorylation is associated with poor survival outcomes in many human cancers. Our previous biochemical and chemoproteomic studies showed that the phosphorylated forms of AKT1 have differential selectivity toward peptide substrates. Here, we investigated AKT1‐dependent activity in human cells, using a cell‐penetrating peptide (transactivator of transcription, TAT) to deliver inactive AKT1 or active phospho‐variants to cells. We used enzyme engineering and genetic code expansion relying on a phosphoseryl‐transfer RNA (tRNA) synthetase (SepRS) and tRNA Sep pair to produce TAT‐tagged AKT1 with programmed phosphorylation at one or both key regulatory sites. We found that all TAT‐tagged AKT1 variants were efficiently delivered into human embryonic kidney (HEK 293T) cells and that only the phosphorylated AKT1 (pAKT1) variants stimulated downstream signaling. All TAT‐pAKT1 variants induced glycogen synthase kinase (GSK)‐3α phosphorylation, as well as phosphorylation of ribosomal protein S6 at Ser240/244, demonstrating stimulation of downstream AKT1 signaling. Fascinatingly, only the AKT1 variants phosphorylated at S473 (TAT‐pAKT1 S473 or TAT‐pAKT1 T308,S473 ) were able to increase phospho‐GSK‐3β levels. Although each TAT‐pAKT1 variant significantly stimulated cell proliferation, cells transduced with TAT‐pAKT1 T308 grew significantly faster than with the other pAKT1 variants. The data demonstrate differential activity of the AKT1 phospho‐forms in modulating downstream signaling and proliferation in human cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».