Protocols to enable fluorescence microscopy of microbial interactions on living maize silks (style tissue)
Notice bibliographique
Résumé
There is interest in studying microbes that colonize maize silks (style tissue, critical for reproduction) including the fungal pathogen Fusarium graminearum (Fg) and its interactions with the microbiome and biocontrol agents. In planta imaging of these interactions on living silks using confocal fluorescence microscopy would provide key insights. However, newly discovered microbes have unknown effects on human health, and there are regulatory requirements to prevent the release of fluorescently tagged microbes into the environment. Therefore, the microbe infection, colonization, and interaction stages on silks prior to microscopy must be contained. At the same time, silk viability must be maintained and experiments conducted that are biologically relevant (e.g. silks should remain attached to the cob), yet the silk tissue must be accessible to the researcher (i.e. not within husk leaves) and allow for multiple replicates. Here we present methods that meet these five contrasting criteria. We tested these methods using Fg and four silk-derived bacterial endophytes. The endophytes were previously known to have anti-Fg activity in vitro, but in planta observations were lacking. In Method 1, a portion of the tip of a cob was dissected, and silks remained attached to the cob in a Petri dish. The cob was placed on a water agar disc to maintain hydration. DsRed-tagged bacteria and GFP-tagged Fg were inoculated onto the silks and incubated, allowing the two microbes to grow towards one another before staining with propidium iodide for confocal microscopy. A variation of the protocol was presented in Method 2, where detached silk segments were placed directly on water agar where they were inoculated with bacteria and Fg to promote dense colonization, and to allow for many replicates and interventions such as silk wounding. The bacterial endophytes were successfully observed colonizing Fg hyphae, silk trichomes, and entering silks via cut ends and wounds. These protocols can be used to study other silk-associated microbes including several globally important fungal pathogens that enter maize grain through silks.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».