On-line aptamer affinity solid-phase extraction capillary electrophoresis-mass spectrometry for the determination of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein
Notice bibliographique
Résumé
• An aptamer affinity sorbent was prepared against the SARS-CoV-2 N protein. • AA-SPE-CE-MS allowed the unequivocal and accurate determination of the N protein. • The method required important adaptations compared to previous studies. • Up to 500 times sensitivity enhancement compared to CE-MS was achieved. • The method was applied to saliva samples. Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is responsible for coronavirus disease 2019 (COVID-19), which has sparked a significant global health crisis in recent years. Among its structural proteins, the nucleocapsid protein (N protein) stands out as one of the most abundant. Despite being well-recognized as an immunodominant antigen in host immune responses and a promising diagnostic biomarker, further insight into this protein with novel analytical methods is crucial for understanding the disease mechanisms. This study focuses on the development of an aptamer affinity sorbent for the purification, preconcentration, separation, characterization, and quantification of the N protein using on-line aptamer affinity solid-phase extraction capillary electrophoresis-mass spectrometry (AA-SPE-CE-MS). Microcartridges packed with a sorbent composed of magnetic bead (MB) particles modified with an aptamer against the N protein were utilized. A rigorous optimization of several method parameters resulted in the use of a lab-made hydroxypropyl cellulose (HPC)-coated capillary to prevent protein adsorption and a neutral background electrolyte (BGE) of 10 mM ammonium acetate (pH 7.0) for the separation. The sample was loaded in the BGE, and the retained protein was subsequently eluted with 1 M acetic acid (pH 2.3). The developed method demonstrated repeatability in terms of migration times and peak areas, exhibited linearity between 2.5 and 25 µg mL −1 , and achieved a limit of detection (LOD) of 0.5 µg mL −1 , providing a sensitivity enhancement of 500 times compared to CE-MS. It was finally applied to the analysis of the N protein in human saliva, pointing out its potential for establishing accurate SARS-CoV-2 complementary analytical methods.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».