Monitoring SARS-CoV-2 Nsp13 helicase binding activity using expanded genetic code techniques
Notice bibliographique
Résumé
-azido-l-phenylalanine (AzF) into Nsp13 for fluorescent labelling of the enzyme with a conjugated Cy5 fluorophore. This Cy5-labelled Nsp13-AzF can then be used in Förster resonance energy transfer (FRET) experiments to investigate the dynamics of enzyme translocation on its substrate during binding and unwinding. Five sites (F81, F90, Y205, Y246, and Y253) were identified for AzF incorporation in Nsp13 and assessed for fluorescent labelling efficiency. The incorporation of AzF was confirmed to not interfere with the unwinding activity of the helicase. Subsequently, FRET-based binding assays were conducted to monitor the binding of Cy5-labelled Nsp13-AzF constructs to a series of fluorescently-labelled nucleic acid substrates in a distance-dependent manner. Overall, this approach not only allows for the direct monitoring of Nsp13's binding activity on its substrate, it may also introduce a novel method to screen for compounds that can inhibit this essential enzymatic activity during viral replication.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».