Bacterial expression, purification and folding of exceptionally hydrophobic and essential protein: Surfactant Protein-B (SP-B)
Notice bibliographique
Résumé
Lung Surfactant Protein B (SP-B) is essential for life. It is thus striking that, to this point, no method for making the full-length protein has been published and consequently we lack detailed understanding of SP-B's basic structure-function relationships, as well as an inability to make it for clinical use. The major challenge in producing SP-B lies with its exceptionally hydrophobic nature. In this work, we present a method to produce recombinant SP-B in bacteria that can be used to make the full-length protein as well as the product focused on here, which is a construct lacking the N-terminal 7 residues, rSP-B (Δ7NTC48S-SP-B-6His). The construct is produced as a fusion to Staphylococcus nuclease A (SN) in Escherichia coli C43 cells, a strain known to promote production of toxic and membrane recombinant proteins. After cleavage from SN, rSP-B is folded on column and then exchanged into the lipid or detergent system of choice. rSP-B prepared in this way exhibits the correct secondary structure and demonstrates surface activity. The yield obtained is 0.3 mg of purified rSP-B (Δ7NTC48S-SP-B-6His) per liter of initial bacterial culture. We expect this method for producing SP-B will be valuable in enabling basic research into SP-B's mechanisms, as well as possibly facilitating the inclusion of SP-B in lung surfactant formulations to treat common and frequently fatal lung conditions and in lung surfactant-based drug delivery.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».