A GFP Complementation-based Dual-expression System for Assessing Cell-Cell Contact Mediated by Cytonemes in Live <em>Drosophila</em> Wing Imaginal Discs
Notice bibliographique
Résumé
Embryonic tissue growth and patterning are largely controlled by signals exchanged locally between cell populations within the tissues themselves. Cytonemes are a type of signaling filopodia first identified in Drosophila that connect and mediate exchange between signal-producing and signal-receiving cells. In the developing Drosophila wing imaginal disc, cytonemes are involved in signal exchange between distinct populations of cells within the disc proper (DP) epithelium, which will form the adult wing, as well as between DP cells and cells in adjacent disc-associated tissues. Cytonemes synapse with target cells to form intimate membrane contacts. Here, we present a protocol for quantifying cytoneme-mediated contact between DP cells and cells of the adjacent peripodial membrane (PerM) epithelium, which is separated from the DP cells by the disc lumen, using a GFP reconstitution approach in live wing discs. Using the GAL4-UAS and LexA-LexAop systems, complementary fragments of split-GFP (spGFP1-10, spGFP11), each fused to the transmembrane domain of CD4, are expressed on either side of the disc lumen. Imaging of reconstituted GFP fluorescence in live wing disc preparations by confocal microscopy is then used to generate image stacks from which reconstituted GFP fluorescence can be localized and quantified. Using this system it is possible to co-express protein-coding or RNA interference transgenes in either cytoneme-producing or target cells to gauge their effect on DP-PerM cell contacts. This system, easily adaptable to other tissues, thus enables the identification of factors important for cytoneme formation or function.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».