Essential Role of Non-Conserved α4-His <sup>178</sup> in Stabilizing the α4-α5 Hairpin and Biotoxicity of the Cry4Aa Mosquitocidal Protein
Notice bibliographique
Résumé
Background: Bacillus thuringiensis Cry toxins are well known for their insecticidal properties, primarily through the formation of ion-leakage pores via α4-α5 hairpins. His178 in helix 4 of the Cry4Aa mosquito-active toxin has been suggested to play a crucial role in its biotoxicity. Objective: This study aimed to investigate the functional importance of Cry4Aa-His178 through experimental and computational analyses. Methods: Ten His178-substituted Cry4Aa mutants (H178D, H178E, H178K, H178R, H178G, H178F, H178Y, H178S, H178C, and H178Q) were generated via site-directed mutagenesis and expressed in Escherichia coli. Toxin solubility was assessed in carbonate buffer (pH 10.0), and biotoxicity was tested against Aedes aegypti larvae. Trypsin-treated toxins were evaluated using fluorescent dye-release assays. Ion channel formation was studied in planar lipid bilayers (PLBs), and structural analysis was performed via MD simulations and sequence alignments with known Cry toxins. Results: All His178-substituted mutants were overexpressed as 130-kDa protoxin inclusions at levels comparable to the wild-type (WT). Replacing His178 with nonpolar or bulky polar residues reduced Cry4Aa biotoxicity to less than 10%, while substitutions with small, moderately polar, or negatively charged residues retained 50-85% activity, consistent with their in vitro solubility. Selected bioactive mutants, H178C and H178D, retained membrane-perturbing ability, like trypsin- activated WT, while the bioinactive H178Y mutant exhibited decreased membrane permeability. All tested mutants, including WT, induced cation-selective channels in PLBs with ~130-pS conductance. Sequence-structure analysis indicated that Cry4Aa-His178 likely forms a hydrogen bond with His217, a conserved His residue in helix 5. Discussion: Specific physicochemical properties of residue 178 are critical for optimal larvicidal activity, making it a promising target for engineering more potent mosquito-control toxins. Conclusion: His178 in Cry4Aa-α4 potentially forms a stabilizing hydrogen bond with α5-His217, which maintains the structural integrity of the α4-α5 hairpin. This structural stability is essential for efficient membrane insertion and optimal larvicidal activity.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
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