Absolute Membrane Potential Recording with ASAP-Type Genetically Encoded Voltage Indicators Using Fluorescence Lifetime Imaging
Notice bibliographique
Résumé
High Resolution Image Download MS PowerPoint Slide The electrical membrane voltage ( V m ) characterizes the functional state of biological cells, thus requiring precise, noninvasive V m -sensing techniques. While voltage-dependent fluorescence intensity changes from genetically encoded voltage indicators (GEVIs) indicate V m changes, variability in sensor expression confounds the determination of absolute V m . Fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) promises a solution to this problem, as fluorescence lifetime is expected to be unaffected by sensor expression and excitation intensity. By examining ASAP1, ASAP3, JEDI-1P, rEstus, and rEstus-NI (G138N:T141I) with one-photon-excited FLIM measurements, we demonstrate that all sensors display a voltage-dependent lifetime. Based on the highest lifetime change in the V m range of −120 to 60 mV, rEstus-NI (798 ps) and ASAP3 (726 ps) are preferred for FLIM recordings. At a physiologically relevant V m of −30 mV, the voltage sensitivity of rEstus-NI (6.6 ps/mV) is 3.6 and 1.4 times greater than that of ASAP1 and rEstus, respectively. As a proof of concept, we successfully used rEstus-NI to estimate absolute resting V m in HEK293T, A375 melanoma, and MCF7 breast cancer cells and quantified spontaneous V m fluctuations in A375 cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».